mtt细胞毒性计算公式-mtt细胞毒计算公式

MTT 那个红珠子测细胞死活，那会儿总认定像是在跟一个看不见的老古董聊天，毕竟它忒老套了，几十年没如何变过样子。但这套流程实际上挺有道理的，核心就是把活细胞和死细胞分开，出于死细胞那个代谢慢，就不如何吃那个蛋了。具体如何搞，你得按部就班来。先拿细胞吹打住，除掉气泡，这一步要是没做好，后面数据全得废，得保证细胞悬液是均匀的，不然测出来的数值全是乱码。
接着加那包 MTT 试剂，把它和细胞按 1:10 的比例混合，这个比例得看说明书，别乱改，毕竟那是死的规矩。混匀之后，把混合液倒进培养瓶要么孔板（就是那种小方格盒），盖严实，放个 37 度、5% 二氧化碳的水箱里孵育 4 到 8 小时。
这工夫是固定的，不管是不是温度高了要么湿度小了，都得守时，工夫一到，细胞内部的那个蓝色结晶就启动变了。 孵育终止，拿个 PBS 洗掉富余的试剂，这一步不能省，洗不够要么洗多了都会干扰读数。倒进显微镜培养盒要么加个盖子，放在暗箱里，别用强光看，不然光把那些结晶都晒坏了，颜色也变不准。轻轻晃动一下，让那些蓝黑色的沉淀物分布均匀，有些沉淀沉底了，有些浮起来，轻轻摇一摇，把悬浮的那些给搅匀，这样测的时候才不好办看错。举例子吧，比如我们测的是某个肿瘤细胞系的 50 个细胞孔，最终发现镜底有结晶体，悬液里有沉淀，那就别怪数据不准了，得先做抗凝要么稀释，让细胞状态变好。 然后才是最关键的一步，吸液。用 10% 的甘油溶液来吸，这个浓度大约每孔 100 微升，要是孔里全是沉淀，吸的时候得先轻轻吹一下，把沉底的结晶体吸出来，不然吸完数据全得崩。等吸好液后，把孔盖好，在暗箱里再等个 30 分钟，这时候那些结晶得慢慢溶解要么稳定下来。最终一步就是读数，拿个酶标仪，波长跟之前孵育的一样，一般选 570 纳米，在 630 纳米挡一下背景。
这时候机器会自动算个平均值，那个数叫 C=10^-7 MTT 吸光度。
记住，这个值越大，说明细胞越多，活着要么半活的可能就越大。 结局出来后，你得自己脑补一下如何判读。
一般来说，活细胞测出来的 C 值肯定大于死细胞，并且活细胞的 C 值一般比死细胞高出一大截，就连高个一倍，这就好比你考数学，及格线是 60，出色是 85，死细胞可能就是一个 65，活细胞就是 80 以上。
要是活细胞的数据都在 65 以下，那说明实验可能搞砸了，要么细胞没孵育好，要么试剂有难题。
有时候死细胞和活细胞的数据忒接近，这时候你得搞个阴性对照，比如加个 BS 液，看看 BS 液能不能把细胞杀死，要是 BS 液里的 C 值挺低，那说明细胞本身状态一般，数据可信度就高了。 实际上 MTT 这东西，说白了就是个定量的杀手锏，能把细胞数量大约数出来，并且不用显微镜也行。但它也有个缺点，就是只能测活性细胞，死的测不出来，并且有些细胞本身代谢就慢，测出来的数值可能虚高，不忒准。
要是你要做更精细的分析，像活体分析要么基因转染，不如用那种电子显微镜要么流式细胞术，那个更直观。
不过对于常规的药效试验要么细胞增殖，MTT 还是那个老江湖，便宜又快，别看不够精细，但好歹能看出个大约，毕竟实验有时候就得靠这个“板砖”撑着。
有时候看着数据波动，心里也发虚，但总比没有数据强，毕竟科研嘛，得有一手，哪怕这手有点迟钝。最终还得提醒一句，每次做实验前，先把说明书看看，别光凭老经验瞎操作，那好办翻车。